上海海洋生物组织外泌体粒径检测

研究采用蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀，极大地降低了外泌体的提取成本，且获得的外泌体不仅表达外泌体公认的标志蛋白分子，同时也表达胎盘特异性蛋白分子，证明通过这种方法获得的外泌体是胎盘来源外泌体。通过蔗糖密度梯度离心后得到的外泌体沉淀经蛋白质SDS-PAGE胶电泳，银染后可见各蛋白分子条带清晰可见，动态光散射分析粒径，结果显示获得的外泌体颗粒粒径大部分分布于28-91nm之间，与文献报道外泌体颗粒大小相一致。胎盘外泌体经过PKH67荧光染料染色后，与细胞共孵育，荧光显微镜下观察外泌体具备进入细胞的活性，进一步验证了我们应用此种改良的分离方法可有效的获得胎盘来源的外泌体。本研究通过蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀成功分离得到母体血清中胎盘来源外泌体，并从蛋白标志分子、电镜、粒径及分布、进入细胞活性四方面对其进行了鉴定，为研究妊娠期间胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘源性并发症中的作用奠定了基础。外泌体是细胞在特定条件下分泌的小囊泡，是细胞间传递信号，相互沟通和影响的重要工具。上海海洋生物组织外泌体粒径检测

唾液中包含来自于唾液腺上皮体外细胞的外泌体，Michael等从唾液中提取外泌体，并对唾液外泌体中的miRNA进行分析，发现此类miRNA有望作为成为唾液腺疾病的生物标志物。Wu等成功从汗液中提取得到外泌体，并进行蛋白质组学分析，在汗液外泌体中鉴定到1062种蛋白质，其中包含多种抗jun肽和免疫因子，表明汗液外泌体参与皮肤免疫。Liu等从患有阿尔兹海默症患小鼠的脑脊髓液中提取得到外泌体，并与野生型小鼠进行对比，发现实验组miR-193b明显下调。黑龙江植物根组织外泌体鉴定干细胞外泌体有减少细胞凋亡、促进血管生成、抑制纤维化等重要生物学功能，在调控组织再生方面有好的前景。

前列腺ai患者尿液外泌体中的miR-574-3p、miR-141-5p和miR-21-5p的表达水平明显上升，表明这些miRNAs可用于前列腺ai的早期筛查。胆管ai是恶性程度较高的消化系统中流，发展隐蔽且临床症状及体征出现晚，故给早期诊断带来困难。高通量小RNA测序筛查了来自胆管ai和胆囊ai患者外泌体中一系列差异表达的miRNA，小RNA长度在正常个体、胆管ai患者和胆囊ai患者之间的分布存在明显差异，胆管ai患者的外泌体中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p、miR-4732-3p明显升高，而胆囊ai患者的外泌体中miR-151a-5p略有升高，为胆管ai和胆囊ai提供了一套新的生物诊断标志物。

外泌体中存在着某些特定的蛋白质、脂质和多糖, 基于抗原–抗体特异性识别和结合作用原理, 可将外泌体从其他组分中分离出来。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜联蛋白、上皮细胞黏附分子或肝素等都可以作为抗原, 而捕获外泌体的抗体可以附着在平板、磁珠、二氧化硅、树脂、膜亲和过滤器、纤维素滤膜、聚酰氨基胺树状聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶联免疫吸附法和磁珠法等。酶联免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作为抗体附着介质, 其结果用吸光度值表示, 该方法可以快速分析已知表面生物标志物的表达, 也可以瞬时读出外泌体的产量和特异性。磁珠法多使用共价包覆链霉亲和素的磁珠, 与样品一起孵育后可通过磁泳将被结合的外泌体从样品组分中分离出来。鉴于微米级磁珠可赋予更大的接触面积, 该方法不jin具有高度特异性, 还具有比超速离心更高的外泌体产率。前列腺ai患者的血浆和尿液中的外泌体含有更多的前列腺特异抗原(PSA)。

在血液和大多数体液（如尿液、脑脊液、唾液、胸腹腔积液、羊水和乳汁等）中均可检测到外泌体。血液外泌体的检测通常采用EDTA抗凝血分离的血浆，miRNA等一些微小RNA则采用血清样本。泌尿系统中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌体外膜则可帮助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌体miRNAs更具有应用价值。相较于血清中相关miRNA的水平，脑脊液外泌体中的miR-21可作为胶质瘤诊断和预后的指标，特别对预测中流复发或转移具有价值。唾液样本在安静状态下主要来源于舌下腺和颌下腺，刺激状态下则主要来源于腮腺。外泌体参与细胞分化、新生血管形成、促进血流恢复和毛xi血管网形成。湖南植物茎组织外泌体wb

外泌体型PD-L1稳定且可与外泌体表面的主要组织相容性复合体Ⅰ协同作用。上海海洋生物组织外泌体粒径检测

由于卵巢中流细胞质膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphati[1]dylserine，PS）可以外泌体形式分泌入血，恶性卵巢ai患者血浆外泌体中的PS水平明显高于卵巢良xing病变患者和健康对照者，因此外泌体中的PS可用于协助早期卵巢恶性中流的筛查和诊断。外泌体可穿透血-脑脊液屏障的特点也为脑中流患者提供了早期诊断的重要工具。血浆微囊泡EGFRvIII mRNA已被证明可作为胶质母细胞瘤患者诊断的支持证据。2020年，David Lyden和William R. Jarnagin教授团队合作，通过探究来自不同ai种组织、血浆和其他体液的426个人类样品中细胞外囊泡和颗粒（extracellular vesicle and particle，EVP）的蛋白质组学特征，鉴定出一批中流特异性血浆EVP蛋白（特异度和灵敏度分别为95%和90%），并可区分患者的中流类型，使基于外泌体的中流诊断和鉴别诊断向前迈进了一步。上海海洋生物组织外泌体粒径检测

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